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原位杂交取样(1)所有用得到玻璃器皿清洗干净,180°C烘6hrs,载玻片先用95%乙醇浸泡、 擦干净,再180°C烘6hrs;所用的试剂瓶需事先装DEPC·H20灭过菌;所用的固定液、乙醇溶液等都要用DEPC·H2O配制。 固定液配制 50%FAA适用于幼穗、SAM等幼嫩组织的固定,70%FAA适用于根、茎秆、 叶片等成熟组织的固定。 (3)取材:将所需材料尽量剪小,加入预冷的FAA固定液中,固定液体积应不少于材料体积的10倍。固定液放冰上,抽真空15min,缓慢放气,再重复两次,直到材料沉底。 (4)固定:将抽完真空的固定液吸走弃去,换成新的固定液。4℃固定24hrs。 (5)脱水:如果是用50%FAA固定,先用50%乙醇洗掉固定液,换三次,每次30min;如果是用70%FAA固定,先用70%乙醇洗掉固定液,换三次,每次30min。然后梯度乙醇脱水(4℃) (8)包埋: (9)切片前的准备: (10)切片: |
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