原代细胞培养基配制方法

赛奥斯的细胞培养体系一般由以下四种（三种）组成：

第一次使用时先将-20℃保存的添加剂、双抗、FBS转移到4℃溶解后，在灭菌后的百级洁净等级环境中操作，所使用的容器和移液耗材均需要进行过无菌处理。添加剂和双抗通常浓度为100X（100倍工作浓度）。血清的添加比例有0%（不添加），1%（5mL），2%（10mL），5%（25mL），10%（50mL）几种。

首先将解冻的FBS、添加剂和双抗进行分装，平均分装成5-10份，留下本次配制所需要的量，剩余的继续放回-20℃保存，之后按需取用融化后配制完全培养基，避免反复冻融。

建议用无菌的50mL离心管盛装配置好的完全培养基。

配制方法：

在每个50mL离心管中加入①500uL添加剂、②500uL双抗、③50×血清百分比mL的胎牛血清、④（50×（1-血清百分比）-1）mL的基础培养基。配制完成后盖上盖子，颠倒混匀备用。

例如：在血清比例为5%的条件下，50mL离心管中各组分的体积分别为：

基础培养基：（50×（1-5%）-1）=46.5mL+添加剂：500uL+双抗：500uL+血清：50×5%=2.5mL

配置好的培养基置于4℃避光保存。由于添加剂中有很多重组蛋白，易发生降解，故配置好的完全培养基有效期仅为3-4周，请尽快使用。因此建议每次配制1-2管（50-100mL），当然使用量大的情况下也可以适量增加配置量。

P.S.：不建议客户将全部的血清、双抗、添加剂直接加入基础培养中混匀使用，原因如下：

1、500mL的基础培养基的体积较大，灌装时体积波动很大，直接加入，无法准确地控制因子和血清的工作浓度。

2、配制好的培养基仅能在4℃保存3-4周，如果期间没用完，继续使用会影响培养效果。如果是-20℃保存，可以延长保存时间，但是反复冻融也会影响完全培养基的效果。

3、如果使用培养基时由于操作失误导致污染，分装能减少培养基的损失量。